O que é Challenge Test e qual sua importância
para fármacos e cosméticos?
O teste do desafio “Challenge test” também
conhecido como teste de eficácia antimicrobiana, teste de desafio
microbiológico ou teste de eficácia do sistema conservante é um teste que visa
assegurar a eficácia dos conservantes adicionados aos produtos farmacêuticos e
cosméticos.
O teste tem como objetivo determinar a
resistência do produto à contaminação microbiana, através da contaminação
proposital da amostra com microrganismos específicos, seguido de avaliação da
amostra em intervalos de tempo definidos, avaliando assim a eficácia do sistema
conservante necessário à proteção do produto.
Importância
O teste é realizado para definir a substância
química e a concentração mínima efetiva para garantir que o produto se mantenha
sem contaminação, conforme a legislação especifica, durante sua fabricação, na
embalagem e distribuição, além de resistir as possíveis contaminações
introduzidas pelo usuário em função do mau uso.
Por meio deste teste é possível verificar se a
dosagem de conservante está adequada ao produto final, e se o produto está apto
a resistir às intempéries na qual será submetido durante o período de validade.
A dosagem insuficiente do conservante pode resultar em crescimento microbiano, comprometendo
a estabilidade do produto, enquanto uma quantidade excessiva, pode causar
reações indesejáveis nos consumidores.
O teste é realizado durante a fase de
desenvolvimento galênico (processo que transforma uma substância ativa em medicamento),
durante o escalonamento da produção e no final do prazo de validade do produto.
O teste também é realizado caso ocorra a alteração da fórmula ou no sistema
conservante, porém, na maioria das vezes, não é realizado no controle microbiológico
de rotina.
Procedimento
O challenge test apresenta diferentes abordagens
de acordo com o tipo de produto que se pretende analisar ou referência adotada,
sendo que estas se aplicam ao produto na forma como ele é encontrado no
mercado, ou seja, como a produto é destinado ao consumidor final.
Os testes apresentam diferença em relação aos
microrganismos padrão, na preparação do inóculo e meios de cultura, solventes e
neutralizantes utilizados, utilização de culturas puras ou mistas, amostragens
após a inoculação e nos critérios de aceitação.
Os métodos de análise estão descritos nos
compêndios oficiais e guias de orientação para análise microbiológica de fármacos
e cosméticos. As metodologias descritas pelas diferentes farmacopeias
(americana, brasileira, europeia e japonesa) é direcionada para produtos
farmacêuticos.
A norma ISO 11930:2019 “Cosmetics — Microbiology
— Evaluation of the antimicrobial protection of a cosmetic product” e as
diretrizes do CFTA (Cosmetic, Toiletry and Fragrance Association) são
especificas para produtos de HPPC (Higiene Pessoal, Perfumaria e Cosméticos).
Os marcadores microbiológicos ou cepas padrões utilizados
pela Farmacopéia Brasileira (2010) e ISO 11930:2019 são as bactérias Escherichia
coli, Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa e os
fungos Candida albicans e Aspergilus niger.
Independentemente das metodologias, o teste compreende
as etapas de inoculação da amostra com uma determinada população de
microrganismos, seguida da incubação e avaliações periódicas até 28 dias para
contagem microbiana dos sobreviventes.
Os critérios de aceitação do teste estão
diretamente relacionados à categoria do produto e são descritos nas normativas,
mas em geral, não pode existir aumento do número de unidades formadoras de
colônias e em alguns casos, este número deve ser reduzido. Para realizar o
challenge test são utilizados os equipamentos básicos para ensaios
microbiológicos, como por exemplo:
- Cabine de segurança biológica – CLASSE
II A1, modelo PA-040-ECO: proteção
ao usuário e amostra durante a inoculação e evitando riscos de contaminação.
- Autoclave vertical, modelo
AV-100: esterilização do meio de cultura e no
descarte de amostra.
- Estufa de Secagem e Esterilização, modelo
TE-393/80L ou TE-393/180L: secagem de vidrarias e materiais.
- Espectrofotômetro digital UV/VIS,
modelo ESPEC-UV-5100: padronização do inóculo.
- Bomba Dosadora de Líquido, modelo
INT-FLEXIPUMP: preenchimento das placas de petri
com meios de cultura. Pode ser realizado de maneira automática através de um Dosador
de Meio de Cultura, modelo BIOTOOL-PETRISWISS.
- Incubadora, modelo TE-3911 ou TE-371/240L para incubação de amostras após
inoculação dos microrganismos.
Os testes de eficácia do sistema conservante são
importantes para o sucesso de uma formulação cosmética ou farmacêutica, uma vez
que em quantidade de conservante superior ou inferior aos necessários podem
alterar o desempenho da formulação.
Para execução do teste são necessários
equipamentos similares aos utilizados em análises microbiológicas, entretanto,
o procedimento do teste pode variar de acordo com a metodologia a ser seguida.
De maneira geral, o teste consiste em inocular microrganismos específicos na
amostra do produto e verificar se o sistema conservante irá proteger a
formulação até o prazo de validade final, garantindo segurança ao consumidor.
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Referências
International
organization for standardization
Cosmetics – Microbiology – Evaluation
of the antimicrobial protection of a cosmetic product. ISO 11930:2019.
Programa de Desenvolvimento Setorial de Higiene
Pessoal, Perfumaria e Cosméticos. Guia de microbiologia: Controle
microbiológico na indústria de higiene pessoal, perfumaria e cosméticos,
Procedimentos, parâmetros, orientações e metodologias analíticas. 1 ed. 2015. Disponível
em: https://superaparque.com.br/upload/20160516-100554-GuiaMicrobiologia.pdf
